Профиля для гкл размеры: Профиль для гипсокартона: размеры, виды, цены

Профиль 60х27 мм для гипсокартона, цена

Толщина металла

0,32-0,35 мм 1 0,35 мм 1 0,35-0,38 мм 1 0,4 мм 4 0,45 мм 1 0,5 мм 2 0,55 мм 3 0,6 мм 6 0,25 мм 0,3 мм 2 мм

Показать ещёСкрыть

Профили для гипсокартона Knauf, цена

Толщина металла

0,6 мм 4 2 мм 6 0,25 мм 0,3 мм 0,32-0,35 мм 0,35 мм 0,35-0,38 мм 0,4 мм 0,45 мм 0,5 мм 0,55 мм

Показать ещёСкрыть

Потолочный профиль для гипсокартона: размеры и виды

Подвесной потолок, сделанный из гипсокартона, имеет прочный каркас. Он, в свою очередь, делается из профилей, соединенных различными видами соединителей и прикрепленных саморезами. Подбирать потолочный профиль для гипсокартона и комплектующие, следует исходя из некоторых советов.

Схема с размерами потолочного профиля для монтажа гипсокартонаВернуться к оглавлению

Полное содержание материала

Потолочный профиль: свойства материала

Потолочный профиль применяется в каждой конструкции. Он делает конструкцию жесткой, прочной, качественно сделанной. Обладает такими свойствами:

1. Оцинковка. Потолочный профиль покрыт оцинковкой. Делается он из стали. Это большое преимущество, потому как на такой профиль не действует влага.
2. Сталь – это очень жесткий металл. Профиль из такого металла не будет податлив коррозии. Срок службы его неограничен.
3. Оцинкованный профиль не может прогнить и быть испорчен насекомыми (как дерево).
4. Профиль из стали не деформируется со временем. На него не может повлиять перепад температуры, сухой воздух или влажность.

   Процесс крепления потолочного профиля к потолку

5. Металлический профиль не поддается заражению грибком.

При таких положительных параметрах каркас из металлического профиля будет надежной опорой для подвесного потолка.

Вернуться к оглавлению

Стоечный профиль (CD или ПП профиль)

Стоечный профиль иногда называют еще и потолочным профилем ПП. Он является незаменимой составляющей потолочного каркаса для обшивки ГКЛ. Потолочный направляющий профиль для гипсокартона «кнауф» (наиболее популярный на строительном рынке) маркируется CD.

Он сделан по таким размерам, что после монтажных работ остатков практически нет. Расход на 1м2 погонный метр – 2.9.

Цена на строительных рынках 60 р. Размеры потолочного профиля для гипсокартона: длина достигает 4 метров; ширина стандартная 60 мм; высота бортиков до 2.8 см.

При таких размерах с ним очень легко работать. Если требуется меньший отрезок профиля, он с легкостью режется.

Вернуться к оглавлению

Виды потолочного профиля для гипсокартона

На строительном рынке существуют виды профилей, которые имеют такие размеры:

Несущий

Маркировка – UD. Он является главным направляющим профилем. По нему равняется вся конструкция каркаса. В него после крепления идет вставка профиля CD. К профилю впоследствии крепится гипсокартон. Ширина UD – 2.8 см, высота 2.7 см. Длина профиля может достигать до 4 метров. Толщина стенки зависит от фирмы производителя. В основном 0.4–0.6 мм. Цена такого профиля 39 р. Расход на 1м2 – по периметру.

Существующие виды потолочного профиля

При решении сделать подвесной потолок, следует брать «толстенький» профиль 0.6 мм. Такой профиль будет создавать жесткость конструкции, что немаловажно для будущего потолка. Более тонкий профиль подходит для монтажа выравнивания стены.

Потолочный направляющий

Профиль маркируется – CD. Этот профиль берет на себя основную нагрузку. Это основа для обшивки ГКЛ. Он также создает жесткость конструкции. Ширина профиля – 6 см, высота его 2.7 см Максимальная длина 4 метра.
В этом профиле есть один минус – он не создан для монтажа арки или другой криволинейной конструкции. Для этих изделий существует арочный профиль. В видео показан процесс монтажа потолочного направляющего профиля.

Перегородочные профили

UW профиль. Такие профили отличаются от плоскостных размерами:

• несущий CW – 50–50 мм, 75–50 мм, 100–50 мм,125–50 мм, 150–50 мм;
• направляющий UW – 50–40 мм, 75–40 мм, 100–40 мм,125–40 мм, 150–40 мм.

Несущий профиль максимум 4 метра. Имеет 2 ребра через всю длину, которые делают стенку более жесткой. В стоечном профиле есть специальный вырез в форме «Н» для проводов и кабеля. Направляющий профиль UW монтируется по периметру для установки общей плоскости. В него вставляются несущие профили. Стоечные профили применимы в монтаже каркаса для гипсокартона, как формирующие. Его крепят с шагом 40 см для совпадения границ листов гипсокартона.

Применение в каркасе подвесного потолка. Здесь их функции такие же. Они больше подходят для монтажа таких каркасов, потому как для подвесного потолка требуется жесткость и практичность.

Вернуться к оглавлению

Вспомогательные детали для потолочного каркаса

Направляющий профиль для гипсокартона служит основой и создает требуемую плоскость поверхности. Крепление происходит при помощи дюбелей и саморезов к стенам, а также к потолку.

• Саморезы для гипсокартона очень многообразны по своей форме и по функциям:
  • для крепежа гипсокартона к каркасу потребуются саморезы TN25;
  • для крепления деталей в каркасе применяются саморезы LB 9, 11, 16.
• Для того чтобы прикрепить направляющий профиль, используются пластиковые дюбели с шайбами;
• Подвесы к потолку крепятся с помощью специального анкер-клина.Монтаж анкер-клина

  Его срок службы неограничен. Из-за специальной обработки, он не подвержен коррозии. Его конструкция позволяет сделать крепление прочным и жестким;

• Соединитель. Он двухсторонний. Применяется для CD. Соединяет профиля на разных уровнях каркаса подвесного потолка. Направление профилей получается перпендикулярное. Монтаж соединителей проходит при помощи саморезов;
• Для работы с профилями требуются саморезы или просекатель механического типа. Работа с просекателем экономит время, но если возникает надобность разобрать металлическую конструкцию из профилей, тогда это будет сделать сложно. Просекателем легко можно сделать отверстия для прокладки проводов и кабелей;
• Для прикрепления профилей к стене, потолку используются подвесы. Они различны в своих модификациях и у каждого есть свои определенные функции. В монтаже подвесы очень просты и не требуют дополнительного времени.Схема крепления потолочного профиля на подвесы

  Расход на 1 м2 идет 0.7 шт:

• Для того чтобы соединить два или больше профилей между собой, нужен краб для гипсокартона. В основном «крабы» устанавливаются в каркасах подвесных потолков. Крабы соединяют профили на одном уровне подвесной конструкции. Расход на 1м2 – 0.7 шт. Нагрузка на соединитель в 1 м2 идет 20 кг. Крабы монтируются при помощи специальных защелок. Саморезы в этом случае не нужны;
• Удлинитель. Предназначен для последовательного соединения CD профилей. При вставке его в профили по бокам вкручиваются 2 самореза для прочности и жесткости;
• Угловой соединитель. Более простой вариант замены «краба». Он имеет один уровень;
• Клещи. Еще один инструмент для соединения профилей. В этом случае саморезы не понадобятся. При помощи этого инструмента можно соединить оцинкованные профили 7 мм;

  Соединение профилей с помощью клещей

• Для сверления отверстий в стене, потолке следует применить перфоратор;
• Для того чтобы сэкономить время и не работать отверткой нужен шуруповерт. Достаточно крутящего момента в 10–15 Нм.

При поверхностных знаниях о профилях и при наборе инструментов для гипсокартона, работа с металлическим каркасом не будет сложной и затяжной. Если следовать алгоритму действий, конструкция получится прочной и надежной.

Вернуться к оглавлению

Фото подборка существующих видов потолочного профиля

размеры и виды с назначением

Выбор металлопрофиля для каркаса ГКЛ

Что это такое
Виды
Производители
Как выбрать

Редкий ремонт внутри квартиры обходится без гипсокартона. С его помощью можно воплотить в жизнь разные дизайнерские идеи от межкомнатных перегородок и арок до многоуровневых потолков. Все эти конструкции монтируются на легкий прочный металлический каркас из профилей. Тому, кто в первый раз сталкивается с этой задачей трудно сразу разобраться в многообразии их типов. Расскажем, какие бывают размеры и виды профиля для гипсокартона, для каких целей можно его использовать.

Он представляет собой швеллер, стенки которого отвечают за жесткость и надежность основы, а спинка служит для прикрепления к вертикальной или горизонтальной поверхности. Для его производства применяют холоднокатаные заготовки из алюминия или стали. Первые имеют отличные характеристики, но и цена их выше. Поэтому большей популярностью пользуются стальные.

Изделия отличаются по внешнему облику, назначению и параметрам. Размеры принято считать в миллиметрах.

Выделяют следующие виды профилей для гипсокартона и их назначение.

Направляющий

Обозначается маркировкой ПН или международной UD и представляет собой основу, которая монтируется по краю будущего сооружения и куда затем крепятся стоечные швеллеры. Применяется при устройстве короба для стен и перегородок. Имеет П-образное сечение и ровные боковые стенки. Размеры направляющего профиля для гипсокартона: глубина 40, ширина 50, 75, 100 (в зависимости от толщины стены), длина 3000.

Потолочный направляющий (ППН)

Нужен для монтирования подвесных каркасов: его прикручивают по краю конструкции, а затем вставляют в него потолочные модели. Кроме этого он может применяться в качестве стоечного для монтажа каркаса при отделке поверхности гипсокартоном, стеновыми панелями. Габариты: глубина 27, ширина 28, длина 3000.

Потолочный (ПП)

Подходит для устройства одно- и многоуровневых подвесных потолков. Отличается от ППН тем, что монтируется к потолку специальными деталями. Его также можно брать для облицовки стен с помощью ГКЛ. Чтобы максимально экономить съедаемую потолком высоту комнаты, глубину его принято делать небольшой — 27. Остальные параметры — ширина 60, длина 3000.

Стоечный (ПС или CD)

Является основной деталью при возведении межкомнатных стен и перегородок. Имеет С-образное сечение. Вставляется в каркас, созданный из направляющих моделей, поэтому его боковые стенки (полочки) немного загнуты внутрь. В спинках этого типа есть отверстия под технические коммуникации. Параметры: глубина 50, ширина варьируется — 50, 75, 100, длина 3000.

Пример крепления стоечной модели. Размеры и виды перегородочного профиля для гипсокартона зависят от конфигурации сооружения: стенки, фальш-камины, ниши и полки.

Вспомогательные

• Маячковый (ПМ) — с его помощью можно направлять правило во время оштукатуривания.
• Угловой (ПУ) используется для укрепления торцевых граней ГКЛ на углах. На его поверхности есть отверстия для свободного проникновения отделочного раствора в основу.

Другие виды

Другие разновидности, применяемые в отдельных случаях: арочный и усиленный. Арочный или гибкий нужен для дверных проемов и закругленных потолочных конструкций. Размеры: ширина 60, длина 3000. Однако цена его довольно высока. Поэтому в целях экономии бывалые мастера используют потолочные модели (ПП). Ножницами по металлу надрезают боковые стороны и сгибают их под нужный контур.

Усиленный (UA) применяется в качестве стоечного при обустройстве дверного проема в перегородках. Поскольку этот участок принимает на себя вес дверного полотна, его усиливают до 2 мм (у Кнауфа) и 1,5 мм у других компаний. Остальные размеры: глубина 40, ширина 50, 75, 100, длина 3000, 4000, 6000.

Выбор толщины

Это основной показатель надежности будущего сооружения. Чем толще изделие, тем больше возможностей его применения. У разных производителей этот показатель отличается — от 0,35 до 0,6 мм.Межкомнатные стены, перегородки советуют возводить с помощью швеллеров толщиной 0,6 мм. Если выбирать более тонкие виды, то при монтаже листов ГКЛ саморезы могут прокручиваться, а сама конструкция прогибаться, что снизит ее прочность. Кроме того, на будущую стену наверняка будут навешиваться полки и шкафчики. Надежность их крепления на стене с тонким профилем будет под большим вопросом.

Самая известная профильная компания — завод KNAUF. Вся выпускаемая продукция одинаковой толщины — 0,6 мм. Кроме того она отличается точными размерами, качественным сырьем. На каждом изделии нанесено название и технические параметры. Однако стоимость их довольно высока. Достойным конкурентом выступает Gyproc. Все производимые ими швеллеры перфорированные, поэтому даже при толщине 0,5 мм они прочнее, чем гладкокатаные с их 0,6 мм. Однако по отзывам мастеров не всем удобно работать с рифлеными из-за сложностей заведения стоечных в направляющие.В среднем ценовом сегменте работает российская компания «Металлист», выпускающая оцинкованные модели. Существуют и другие производители. Качество их продукции может отличаться по составу сырья, конфигурации изделий. В некоторых добавлены дополнительные бороздки для усиления жесткости, отверстия для крепления.

Чтобы правильно посчитать количество профилей, можно нарисовать план конструкции, обозначить виды и габариты моделей.В некоторых строительных магазинах можно встретить окрашенные изделия. Консультанты говорят, что краска служит дополнительной защитой материала. Но это не так. Чаще всего под краской скрывается заводской брак. Поэтому покупать такой продукт крайне рискованно.

Какой профиль нужен для перегородки из гипсокартона? Выбирая между гладкими и рифлеными разновидностями, нужно иметь в виду, что для монтажа перегородочных сооружений рифленые типы не подходят. Любое здание может дать усадку. А швеллеры с неровной поверхностью фиксируются жестко. В результате на листах гипсокартона могут возникать трещины.

В строительных магазинах стандартная длина этих изделий — 3000 мм. Однако производители выпускают модели разной длины — от 2500 до 6000 мм. Поэтому в случае необходимости можно заказать у компании-продавца нестандартный размер. Обратите внимание на профиль эконом. Он отличается от стандартных изделий уменьшенными габаритами, толщиной, более низкой ценой. Сфера его применения — декоративные ниши и выступы. Монтировать с его помощью перегородки или потолки опытные мастера не советуют.

размеры и виды профилей и их назначение

Для изготовления конструкций из листов гипсокартона используется оцинкованная профиль, включающий в себя широкий ассортимент элементов для изготовления конструкций различного уровня сложности.

Оцинкованное покрытие защищает профиль от коррозии и прочих внешних воздействий. Как результат: конструкции получаются устойчивыми к воздействию влаги и воды, что продлевает их срок эксплуатации.

При правильном монтаже профильные конструкции не имеют ограничения по сроку службы, а значит готовый потолок, обшивка стен или перегородки прослужат максимально долгий срок.

На рынке представлен широкий ассортимент профильных систем различных производителей, от немецкого бренда Кнауф до отечественных изготовителей, предлагающих не менее качественный продукт по конкурентоспособной цене. Для того, чтобы получить качественный результат при сборке интерьерных конструкций, нужно точно знать какой профиль для ГКЛ используется для тех или иных целей. Рассмотрим подробнее профиль для гипсокартона, размеры и виды используемых систем и материалов.

Содержание статьи

Виды профилей для гипсокартона и их назначение

Профиль разделяется по сферам применения и походит для сборки различных конструкций следующего типа:

• Потолочные – изготовление подвесных потолков линейного типа или со сложной геометрией;
• Стеновые – для выравнивания, обшивки стен;
• Перегородочные – изготавливаются перегородки для помещений;
• Арочные – для изготовления арок и криволинейных конструкций в том числе потолочного типа.

Рассмотрим подробнее виды профилей для гипсокартона и их назначение при практическом использовании.

Профиль направляющий – «П» образный профиль с гладкими наружными краями. Применяется при изготовлении перегородок, при облицовке стен. Монтируется на стены, полы и другие поверхности, служит для фиксации стоечного профиля. Маркируется буквами ПН после которых обычно указывается размер профиля. Ширину необходимо подбирать исходя из габаритов стоечного профиля, для получения прочной и однородной конструкции. Какой бывает по размерам профиль:

• Длинна – от 2,75 до 4,5 метров;
• Ширина от 50 до 100 мм;
• Высота – 40 мм.

Профиль стоечный – имеет «П» образную форму с загнутыми внутрь краями граней. Это необходимо для повышения прочностных и несущих характеристик профиля, что особенно важно, так как этот материал является несущим элементом при сборке конструкций.

Применяется для изготовления перегородок, а также в ходе облицовки стен. При монтаже вставляется в направляющие элементы для выравнивания в линейном порядке. При использовании ширина стоечного профиля должна соответствовать ширине направляющих. Маркируется буквами ПС  с дальнейшим указанием параметров размера. Предлагаются следующие размеры:

• Длинна — от 2,75 до 4,5 метров;
• Ширина – от 50 до 100 мм;
• Высота – 50 мм.

Потолочный профиль – схож по форме со стоечным профилем, но при этом имеет более низкую высоту плеча. Используются для создания основной поверхности каркаса. Отличается повышенной прочностью благодаря дополнительным продольным канальцам. При монтаже монтируется в специальный направляющий профиль для потолка. При продаже маркируется буквами ПП с указанием габаритных характеристик. Имеет следующие размеры:

• Длинна – 2-4 метра;
• Ширина – 60 мм;
• Высота – 27 мм.

Направляющий профиль для потолка – потолочный профиль монтирующийся непосредственно на стены по контуру изготавливаемого каркаса. В дальнейшем, при монтаже в него вставляется профиль типа ПП при сборке поперечных или продольных элементов. Имеет «П» образную форму без внутренних загибов. Обладает следующими габаритами:

• Длинна 2-4 метра;
• Ширина – 28 мм;
• Высота – 27 мм.

Арочный профиль – представляет собой профильную конструкцию, позволяющую изготавливать криволинейные элементы с плавным изгибом. Используются как при монтаже арочных пролетов, так и для изготовления закругленных элементов потолочных, стеновых систем. Представлен в следующих размерах:

• Длинна – 2,6-4 метра;
• Радиус (вогнутый) – от 500-1000, до 4001-5000 мм;
• Радиус (выпуклый) – от 1001-2000, до 4001-5000.

Также профиль может различаться по толщине стали. Не стоит отдавать предпочтение чрезмерно тонким конструкциям, так как они не достаточно прочны, особенно при сборке габаритных конструкций. Существуют и алюминиевый профиль, как правило, используемы при монтаже габаритных конструкций и при необходимости снижения их веса. Стоит он значительно дороже обычного стального аналога.

В продаже представлен широкий ассортимент комплектующих крепежных элементов, для боковых соединений, крестообразных и угловых стыков. Для отделки наружных углов ГКЛ поставляется перфорированный стальной профиль, повышающий их механическую прочность.

Какие профиля нужны для перегородки из гипсокартона

Переходя к непосредственному применению материала, рассмотрим подробнее, какие профиля нужны для перегородки из гипсокартона. В целом, для сборки конструкции достаточно направляющего профиля ПН и стоечного ПС. Ширина подбирается исходя из желаемой ширины перегородки.

На первом этапе собирается прямоугольник из направляющих, в которые затем будет вставлен стоечный профиль. Направляющие монтируются к полу, потолку и одной из стен. Далее в них вставляются вертикальные отрезки стоечного профиля и фиксируются при помощи саморезов.

Шаг профиля в зависимости от площади стены составляет 40-60 см. При необходимости усилить конструкцию можно поперечинами, которые соединяются со стоечными фрагментами при помощи специальных металлических креплений на саморезах. Перегородочный профиль должен быть согласован между собой по ширине.

Какой профиль нужен для стен из гипсокартона

При обшивке или утеплении стен, возникает вопрос: какой профиль нужен для стен из гипсокартона. Для этих работ используются те е материалы, что и для сооружения перегородок. В частности, потребуется профиль направляющий ПН и стоечный ПС.

Направляющий профиль для монтажа гипсокартона монтируется на стенах, полу и потолке, выравнивается по вертикали и горизонтали. Далее в него вставляются вертикальные элементы стоечной системы. Для повышения прочности предварительно можно закрепить перфорированные элементы для фиксации стоек на стене.

Поле крепежа перфорированный профиль загибается таким образом, чтобы обхватить стойку и фиксируется при помощи саморезов. Шаг составляет от 40 до 60 см. От размера шага зависит расход профиля на 1м2 гипсокартона, стена при достаточной прочности и ровном основании, может изготавливаться с максимальным шагом – 60 см.

Какие профиля нужны для потолка из гипсокартона

Какие профиля нужны для потолка из гипсокартона? Отвечая на этот вопрос, стоит помнить, что для потолочного монтажа разработана отдельная профильная система. Для монтажа используются направляющие и потолочные профиля, соответственно – ПН и ПП. Также потребуются перфорированные прямые или анкерные подвесы.

На первом этапе, по контуру потолка монтируются направляющие элементы на нужной высоте. Установка производиться на все четыре стены. Далее в направляющие вставляются потолочные элементы профильной конструкции, располагающиеся по ширине помещения. Они фиксируются на потолке при помощи подвесов, а также соединяются анкерами с направляющими элементами. Далее монтируются поперечины, состоящие из коротких кусков профиля, нарезанных по ширине шага потолочного профиля. Фиксация производиться на соединительный профильный элемент при помощи саморезов.

После того как металлический профиль прочно зафиксирован производиться обшивка поверхности. Для повышения надежности конструкции, может использоваться усиленный профиль повышенной толщины.

Если планируется многоуровневый потолок, то принцип работ схож, но после сборки первого яруса собирается второй, также на подвесах. Для отделки торцов используется торцовый профиль, если планируется фигурный край, то можно использовать арочные элементы или произвести соответствующую обрезку направляющего профиля. При сборе фигурных потолочных элементов, большое значение имеет правильно подобранная длинна профиля для гипсокартона, что обеспечит жесткую фиксацию материала.

Как выбрать качественный профиль

Выбирая профиль для устройства стен из гипсокартона или монтажа подвесных потолков, нужно обращать внимание на признаки говорящие о качестве или ненадежности профиля. В первую очередь обращайте внимание на следующие детали:

• На металле не должно быть коррозии – ржавчина говорит о некачественном покрытии, также о нем может сказать обильная смазка поверхности;
• Обратите внимание насколько ровным, является профиль – если рейка выглядит перекрученной, значит, была нарушена технология проката, получить ровный каркас с таким материалом не получится;
• На поверхности краев не должно быть заусенцев – прежде всего это говорит о нарушении технологии, но также значительно усложняет монтаж, так как о металлические зазубрины можно легко порезать руки;
• Качество насечек – профиль имеет насечки, более тонкие места на корпусе, позволяющие проще вкручивать саморезы. Если они недостаточно глубокие, это также осложнит монтаж, особенно в случае с профилем повышенной толщины.

Независимо от того, выбираете Вы перегородочный или стеновой профиль, продукция должна соответствовать стандартам качества, иначе монтаж будет усложнен ненужно работой, а Вы потеряете время на устранение ошибок производителя. Определить качественный профиль можно сразу, если же Вы не доверяете своему опыту, то достаточно отдать предпочтение проверенной и известной марке, производящей различные разновидности и типы профильных систем.

Полезное видео про выбор гипсокартона

Каким бывает профиль перегородочный для гипсокартона: рассмотрим основные виды

На сегодняшний день ГКЛ (гипсокартонный лист), получил практически повсеместное применение при выполнении отделочных работ. Это связано в первую очередь с теми качествами, которыми обладает указанный материал. К ним можно отнести ценовую доступность, легкость монтажа и всегда отличный результат. Для возведения конструкций или выравнивания стен, как правило, используют перегородочный профиль для гипсокартона, он имеет несколько видов, каждый из которых используется для своих конкретных целей.

При выборе профиля для гипсокартона необходимо учитывать размеры и предназначение каждого.

Для того чтобы правильно подобрать профиль для перегородок из гипсокартона, важно учитывать не только его размеры, но и назначение каждого конкретного элемента конструкции. Ведь собранный не по правилам каркас, кроме того, что будет крайне ненадежным, может даже принести вред здоровью, если при обрушении неправильной конструкции кто-то окажется рядом с ней.

Сам по себе, помимо разделения на две основные группы – несущий и направляющий, он имеет некоторые особенности. Необходимо знать, где и каким из них пользоваться. Давайте подробно рассмотрим, какие разновидности существуют.

Отличают два вида этих элементов – несущий и направляющий. Как отличить один от другого? Высота боковых стенок у несущего всегда равна пяти сантиметрам. У направляющего она составляет четыре. Кроме того, у несущего бортики армированы продольными складками, в то время как у направляющего они гладкие.

Направляющий, или базовый

Правильным ответом на вопрос, какой профиль нужен для перегородки из гипсокартона, будет следующий: он должен быть двух видов – направляющий и несущий, или стоечный.

Направляющий монтируют к базовым поверхностям, выстраивая опору, на которую в дальнейшем будут крепить весь остальной каркас. Он бывает следующих видов:

• Шириной пять сантиметров и с высотой бортов четыре сантиметра. Это самый маленький из всех представленных на рынке несущих профилей. Меньше только несущий профиль с размерами 28 на 27 миллиметров, используемый крайне редко. Строго говоря, узкие направляющие используют в первую очередь в местах, где необходимо максимально сэкономить место, например при необходимости выровнять стену без большой потери площади.

Для того чтобы конструкция из ГКЛ занимала минимальное место в помещении, используют следующий способ: берут минимально широкий направляющий элемент, устанавливают его как можно ближе к черновым стенам, проверяя уровнем и отвесом. После этого через каждые шестьдесят сантиметров ставят несущий, крепя его к стене монтажной стальной лентой и выравнивая по уровню. Такая система позволяет, не отступая десять сантиметров от стены, получить хорошие ровные стены из ГКЛ.

• Если нужно построить стену или перегородку, используют направляющие шириной 7,5 и 10 сантиметров в зависимости от того, какую толщину готовой конструкции планируют получить. Высота бортов у них составляет четыре сантиметра.

Это все возможные варианты направляющего профиля. Он выпускается длиной три, четыре и четыре с половиной метра.

При установки перегородки из гипсокартона заранее позаботьтесь о шумоизоляции.

Если вы решили установить дома каркас для перегородки из гипсокартона с последующей его обшивкой – позаботьтесь о шумоизоляции. Для этого, кроме специальных наполнителей для простеночного пространства, нужно использовать ленту-уплотнитель, укладываемую между несущим профилем и базовой поверхностью. Такой прием избавит от лишнего «гула» и «звона» готовой перегородки.

Несущий, или стоечный

Строго говоря, перегородка из профиля для гипсокартона состоит из несущих профилей. Направляющие прикрепляют только к базовым поверхностям. При возведении каркаса для ГКЛ перегородки используют следующие виды несущего профиля:

• Самый небольшой несущий профиль имеет ширину пять сантиметров и такую же высоту боковых стенок.
• Далее идут размеры 7,5 и 10 сантиметров. При этом высота бортов остается равна пяти сантиметрам.

Именно из такого материала делаются опорные стойки и поперечные перемычки, из которых состоит каркас конструкции для обшивки ГКЛ. Стоечный, или несущий, профиль делают по ширине равным направляющему. Однако если брать профили от одного производителя, то можно увидеть, что на деле размер несущих частей на пару миллиметров меньше. Это делается для облегчения сборочных работ.

Обратите внимание. Бывают несущие, или стоечные, изделия, в которых выполнены технические отверстия для протяжки коммуникаций внутри перегородок и конструкций из гипсокартона. Выбор таких вариантов исполнения существенно облегчит работу по прокладке электро- и других сетей, когда возникнет такая необходимость.

Стоит отдельно отметить металлический перфорированный уголок, который также относят к профилям для работы с ГКЛ. Его используют для того, чтобы укрепить угловые стыки уже готовой и обшитой листами конструкции.

Инструментарий

Теперь, когда вы знаете, какой профиль для перегородок из гипсокартона бывает и для чего используется каждый вид профиля, стоит уделить внимание инструменту для работы непосредственно с профилем. Для того чтобы работа проходила максимально быстро, качественно и эффективно, необходимо иметь следующий инструмент:

• Рулетку, уровень и маркер иметь просто необходимо. Именно с ними будет связан весь первичный этап работ. С их помощью вы нанесете на базовую поверхность линию, по которой будет уложен каркас из профилей, а также будете постоянно использовать указанные инструменты при проведении работы по построению каркаса.
• Строительные перчатки. Не стоит удивляться. Предстоит работа с металлом, это потребует физической силы и ее применения. Если хотите избавить себя от травм и от мозолей, необходимо приобрести этот аксессуар. Причем он должен быть из достаточно плотной ткани. Китайские дешевые перчатки практически не защитят ваши руки, а работать в них крайне неудобно.
• Ножницы по металлу. Нарезать профиль для гипсокартонных перегородок можно только специальными ножницами или болгаркой. Но опыт показывает, что ножницы удобнее в работе. Главное – брать варианты, которые имеет механизм усиления ручной тяги. С такими ножницами уставать вы будете меньше, а результат работы будет более аккуратным.
• Высекатель. Нужен для соединения частей конструкции друг с другом. Многие не знают про такой инструмент и пользуются саморезами, но у них есть большой недостаток – они нарушают ровность лицевой поверхности конструкции. И все эти неровности выступят потом на готовой стене. В то время как высекатель сшивает части каркаса, не нарушая лицевой геометрии.
• Киянка с резиновой головкой и пассатижи. Помогут подровнять нужные места и подогнать части конструкции друг к другу.

Перегородка из гипсокартона состоит из несущих профилей, а направляющие прикрепляют только к базовым поверхностям.

Вот и все, что потребуется для работы непосредственно при построении каркаса. Для крепежа каркаса к базовой поверхности используют монтажную стальную ленту, а все остальные работы уже связаны с обшивкой каркаса ГКЛ.

Подводя итог

Работать с гипсокартоном довольно просто и по силам каждому. Технологическая сторона вопроса не так сложна, как можно видеть из сказанного выше, и по силам каждому. Все, что нужно, – это приобрести качественные инструменты и материалы, ну а дальше все довольно просто. Не бойтесь открывать для себя новое. Гипсокартон по силам каждому, в том числе и вам.

Профиль и комплектующие для гипсокартона

Использование гипсокартона находит все большее применение в современном ремонте, и многие с удовольствием создают из него самые разнообразные конструкции, не забывая при этом о таком важном моменте, как профиля и комплектующие.

 

Металлический профиль, при помощи которого монтируется конструкция из ГКЛ, представляет собой оцинкованный металлический профиль, который при помощи саморезов по металлу соединяется между собой. При помощи подобных шурупов крепится и лист гипсокартона или гипсоволокна. Для облегчения веса конструкции возможно применение перфорации.

 

Профиль для гипсокартона — виды и размеры 

 

За счет того, что в основе профиля используется оцинкованный лист, профиль не подвержен коррозии. Поэтому его можно использовать даже в помещениях с повышенной влажностью. Для различных конструкций из гипсокартона применяются различные типы металлических профилей. Существует два основных типа профилей – стоечные и направляющие, они могут быть различной ширины и высоты, но при этом должны соответствовать принятым стандартам.

 

Итак, первый вид профиля для гипсокартона – направляющий. Аббревиатура – ПН (расшифровывается профиль направляющий). Такие профиля имеют П-образное сечение и гладкие боковые стенки. Производители выпускают ПН следующих размеров: 28*27 мм, 50*40 мм, 65*40 мм, 75*40 мм, 100*40 мм. Производятся из стали или алюминия. Данные профиля являются той основой, к которой крепится вся остальная конструкция. Устанавливается по периметру комнаты, составляя базу для дальнейших работ. Крепятся к стене саморезами, которые вставляют в отверстия профиля.

 

Следующий вид профиля – стоечный (ПС). Именно на него крепится гипсокартон, то есть на него ложится основная нагрузка, поэтому он имеет более жесткую структуру. Так же как и направляющий профиль имеет П-образную структуру и разные размеры (50*50 мм, 65*50 мм, 75*50 мм, 100*50 мм), но может иметь дополнительные ребра жесткости и полочки.

 

Потолочные профиля могут быть направляющими (ППН) и несущими (ПП). Предназначены для создания подвесных потолков, а также облицовки стен. Такие профиля изготавливают из стали, покрытой оцинковкой. Это предотвращает коррозию металла. Такие профиля не деформируются со временем и становятся надежной основой для гипсокартона.

 

Угловые профиля (ПУ) имеют форму прямого угла и выступающую центральную часть. Предназначены для создания угловой части конструкций из гипсокартона, упрощают оштукатуривание готовой конструкции. Имеют перфорированную структуру, за счет этого упрощается крепление профиля. Также производители выпускают угловые профиля с сеткой, которая улучшает скрепление со стенкой.

 

Для создания арок и скругленных дверных проемов используют арочные (гнутые) профили. Такие профиля отличаются высокой гибкостью за счет дополнительных разрезов по бокам.

 

 

Соединители для профиля под ГКЛ

 

Отдельного внимания заслуживает и такой момент, как разнообразные соединители для профилей. С их помощью можно создавать достаточно сложные и достаточно жесткие металлические конструкции, служащие основой для гипсокартонных листов или для других облицовочных материалов больших площадей. При создании подвесных потолков направляющие элементы могут быть недостаточной длины. В этом случае используют удлинитель профиля, с помощью которого наращивают потолочный профиль. Он также изготовлен из оцинкованной стали и обладает пружинными свойствами.

 

При создании сложных подвесных конструкций просто необходимы специальные подвесы, которые придают конструкции большей жесткости и снижают нагрузку на несущие профиля.

 

Маячковые профили для штукатурных работ

 

Во время проведения работ по выравниванию стен или пола просто необходимо иметь специальные маячковые рейки, которые заранее выставляются по уровню и служат отличным ориентиром при монтаже стяжки или штукатурно-шпаклевочных работах.

 

Если же во время штукатурных работ нужно создать идеально ровные внешние и внутренние углы, то стоит приобрести перфорированные уголки, которые значительно упрощают процесс ремонта.

 

 

Выгодные цены на комплектующие в Нижнем Новгороде

 

На нашем сайте вы можете заказать профиля и комплектующие для гипсокартона по выгодным ценам. Так же наш менеджер детально проконсультирует Вас по всем видам профиля, даст рекомендации по выбору других строительных материалов, гипсокартона, штукатурной смеси и грунтовки. Осуществляем доставку заказа по Нижнему Новгороду и области.

Brother HL-L2370DW — принтер — Ч / Б — лазер. Характеристики

Требуется ОС

Android, Apple MacOS X 10. 10, Apple iOS, Apple macOS 10.12, Apple macOS 10.13, Linux, Microsoft Windows 7 (32/64 бит), Microsoft Windows Server 2008 (32/64-бит), Microsoft Windows Server 2012 (64-разрядная), Microsoft Windows Server 2016, Windows 10 (32/64 бит), Windows 10 S, Windows 8 (32/64 бит), Windows 8. 1 (32/64 бит), телефон с операционной системой Виндоус

Комплект для гольфа Wilson Profile HL Complete Package

Описание продукта Один размер не подходит всем. Это правда. Люди лучше играют с оборудование, подходящее для них.Набор пакетов профиля — единственный система «индивидуальный размер в коробке». Имеется 9 вариантов длины, лофтов, гибкость, сумки и размер рукоятки, чтобы они идеально подходили начинающим гольфистам и их уникальные физические характеристики. Подробнее о продукте Рейтинг продаж Amazon: # 8962 в категории «Спорт и туризм» Бренд: Wilson Модель: Wilson Profile HL Cmpt Pkg Golf Set Дата выпуска: 15 февраля 2013 г. Размеры: 12,00 фунтов Характеристики Полный набор, состоящий из 15 частей, включает водителя, фервей, гибрид, утюги 5-SW, клюшки, сумку и головные крышки Мощный дизайн фокусирует все характеристики для обеспечения расстояния и контроля Расстояние, разработанное для более быстрого скорость поворота Прочный деревянный фарватер и легкая сумка-подставка с двойным плечевым ремнем и самоактивирующейся подставкой Гибридная технология значительно упрощает удар, чем длинные утюги Редакционные обзоры От производителя Один размер не подходит всем.Это правда. Люди лучше играют с оборудованием размер, чтобы соответствовать им. Набор пакетов профиля — единственное, что подходит для box ‘система. Имеется 9 вариантов длины, лофтов, гибкости, сумок, и размер рукоятки, чтобы они лучше подходили начинающим гольфистам и их уникальным физические характеристики. Отзывы клиентов Самые полезные отзывы клиентов 1 из 1 человек нашел следующий обзор полезным. Хорошие клубы Брэндон Симпатичные клюшки и хороший удар по мячу.Немного вибрации утюгами, но это, вероятно, потому, что я не нахожу sweetspot пока нет. Сумка достойного качества. Лучшая часть, наверное, драйвер и 3 дерева.

HI-LOK ™ ️ Крепежные детали (HI LOK ™ ️) | Джет-Тек

HI-LOK — зарегистрированная торговая марка Hi-Shear Corporation. Самую последнюю версию рисунков ниже можно найти на https://www.lisi-aerospace.com/en/. Штифты HI-LOK обычно используются в приложениях, требующих высокой прочности на разрыв в экстремальных условиях.Штифты HI-LOK и хомуты HI-LOK имеют чрезвычайно точные размеры, благодаря чему крепежные детали HI-LOK широко используются в космической, военной и коммерческой авиации. Штифты HI-LOK и хомуты HI-LOK имеют резьбу и требуют общих установочных инструментов, что упрощает установку и снятие крепежных элементов HI-LOK.

HI-LOK — это простая двухкомпонентная застежка, разработанная для достижения в одной универсальной системе конструктивных особенностей, соответствующих многим современным требованиям аэрокосмической сборки. Стабильный крутящий момент на каждой установленной застежке достигается за счет совместной работы интегрированных функций системы.Тщательно отрегулированная канавка для отрыва в самоблокирующейся манжете HI-LOK обеспечивает равномерные значения предварительного натяга за счет отделения при достижении правильного уровня крутящего момента. Этот контролируемый предварительный натяг каждого HI-LOK ^TM в конструкции значительно увеличивает усталостную долговечность планера по сравнению с другими системами крепления, включая тип с обжимным кольцом.

HI-LOK ^TM закручен. Конструкция с автоматическим отрывом муфты гарантирует это и устраняет необходимость в проверке крутящего момента.Как высокоэффективная и надежная система.

В качестве универсального крепежа конструкция HI-LOK ^TM позволяет делать больше с меньшими затратами, решая серьезные проблемы и обеспечивая высокое сопротивление усталости без ущерба для прочности. Легкое кольцо HI-LOK ^TM дополнительно способствует снижению веса по сравнению с обычными системами гаек и болтов с одинаковыми прочностными характеристиками. Система HI-LOK ^TM , производимая в широком диапазоне размеров и комбинаций материалов, предлагает конструкторам готовое решение для множества проблем сборки.

Прочие штифты HI-LOK

Хомуты HI-LOK

Руководство по выбору стандартного и кованого воротника:

Примечания: * Увеличенные хомуты могут использоваться с штифтами меньшего размера.

** обозначает конфигурацию хомута кованого типа.

Хомуты HI-LOK изготовлены в соответствии с требованиями ТУ 345 на высокий сдвиг.

Все размещенные Ошейники HI-LOK

Механические стопорные штифты HI-LOK

HI-LOK Механические стопорные хомуты

Метрические штифты HI-LOK

Метрические хомуты HI-LOK

Размер ручки USB-регистратор данных температуры и влажности с дисплеем

Обзор серии OM-HL-SP Серия OM-HL-SP включает в себя регистраторы данных только температуры и температуры и влажности с интерфейсом USB, специально разработанные для таких приложений, как пищевая промышленность, биомедицина, транспортировка по холодным цепям и дикая природа Мониторинг.

Дизайн размером с ручку имеет степень защиты IP67, что обеспечивает высокую водонепроницаемость и пыленепроницаемость. Кроме того, энергосберегающий аккумулятор может работать до 12 месяцев, прежде чем потребуется его замена. Эта серия OM-HL-SP стоит от 60 долларов и предлагает отличный пользовательский интерфейс для запуска и остановки регистрации по кнопке, задержке или определенному времени. Просто подключи и работай, чтобы просматривать, загружать и отображать графические данные с помощью бесплатного программного обеспечения Logpro.

Технические характеристики
Диапазон температур: от -30 до 70 ° C (от -22 до 158 ° F)
Точность температуры:
OM-HL-SP-T: ± 1.0 ° C
OM-HL-SP-TH: ± 0,5 ° C
Объем записи: 43000 точек

OM-HL-SP Инструкция по эксплуатации Диапазон влажности:
OM-HL- SP-T: NA
OM-HL-SP-TH: 0-95% RH
Точность влажности:
OM-HL-SP-T: NA
OM-HL-SP-TH: ± 5% относительной влажности
Разрешение: Температура: 0,1 ° C / Влажность: 0,1% относительной влажности
Источник питания: 1 / 2AA, 3. Литиевая батарея 6 В — в комплекте
Стандартный срок службы батареи: 1 год
Степень защиты IP: NEMA 6 (IP67)
Часто: 2 секунды до 24 часов
Дисплей: ЖК-дисплей
Размер ЖК-дисплея: 18 л x 13,5 Вт мм (0,7 x 0,53 дюйма)
Размеры: 125 Д x 28 Ш x 22 Диаметр мм (4,92 x 1,1 x 0,86 дюйма)
Вес: 60 г (2,1 унции)

Программное обеспечение для анализа регистратора Logpro
Logpro — это комплексное программное обеспечение для анализа данных регистратора температуры и влажности, предназначенное для регистрации настроек атрибутов, эффективной загрузки данных регистратора, графического анализа данных и экспорта данных в Excel / PDF / BMP и другие форматы по необходимости.

Программный интерфейс прост в использовании и эффективен для максимальной регистрации, мониторинга и анализа данных. Пожалуйста, смотрите видео по установке программного обеспечения для получения более подробной информации.

Установка программного обеспечения OM-HL-SP

HL-L2310D | Монохромный лазерный принтер

Максимальное соотношение цены и качества

Стоимость является ключевым фактором как для дома, так и для бизнеса. Мы позаботились о рентабельности эксплуатации и обслуживания HL-L2310D.Использование наших картриджей с тонером повышенной емкости в сочетании с автоматической двусторонней печатью может значительно снизить стоимость каждого задания на печать.

Производительность для офисов будущего

Разработанный для настройки и готовый к использованию за считанные минуты, HL-L2310D оснащен множеством функций, позволяющих сэкономить время, со скоростью печати до 30 страниц в минуту, гарантируя, что вам никогда не придется долго ждать получения этого важного документа.

Благодаря большому лотку для бумаги на 250 листов вам больше не нужно регулярно пополнять лоток для бумаги. Вместе с прорезью для ручной подачи, которая может обрабатывать самые разные типы бумаги, вы можете получать документы лазерного качества — все на одном компактном устройстве.

Бесшумно без компромиссов

Быть тихим больше не означает медлительность. Все модели в этом диапазоне обеспечивают тихую печать при уровне менее 50 дБ.Эти принтеры идеально подходят для установки на вашем столе, тихой печати на полной скорости и непрерывной работы.

Создан для дистанции

Создан, чтобы работать дольше. Линейка монохромных лазеров Brother была разработана для вас и вашего бизнеса. Изготовлен из прочного и износостойкого материала, обеспечивающего уверенность в том, что ваш принтер будет продолжать работать.

Экологичный

Линейка монохромных лазеров Brother

соответствует ряду экологических стандартов, включая German Blue Angel и Nordic Swan. В результате он не только помогает вашему бизнесу работать более эффективно, но и более энергоэффективен, уменьшая воздействие на окружающую среду и в то же время снижая ваши расходы.

Базовый профиль

— обзор

Уровень кодирования видео

Цветовое пространство YCbCr

H.264 использует цветовое пространство YCbCr, поддерживая выборку 4: 2: 0, 4: 2: 2 и 4: 4: 4. Варианты дискретизации 4: 2: 2 и 4: 4: 4 увеличивают разрешение цветности по сравнению с 4: 2: 0, что приводит к лучшему качеству изображения.Помимо 8-битных данных YCbCr, H.264 поддерживает 10- и 12-битные данные YCbCr для дальнейшего улучшения качества изображения.

Макроблоки

В H.264 было расширено разделение макроблоков 16 × 16. Такая мелкая детализация приводит к потенциально большому количеству векторов движения на макроблок (до 32) и количеству блоков, которые необходимо интерполировать (до 96). Чтобы ограничить сложность кодера / декодера, существуют ограничения на количество векторов движения, используемых для двух последовательных макроблоков.

Маскирование ошибок улучшено с помощью гибкого упорядочивания макроблоков (FMO), который назначает макроблоки другому слайсу, чтобы они передавались в последовательности без сканирования. Это снижает вероятность того, что ошибка повлияет на большую пространственную область, и улучшает маскирование ошибок за счет возможности использовать соседние макроблоки для прогнозирования пропущенного макроблока.

Компенсация движения

Компенсация движения ¼ пикселей:

Точность компенсации движения улучшена по сравнению с точностью ½ пикселя, используемой в большинстве ранних видеокодеков.H.264 поддерживает ту же точность ¼-пикселя, которая используется в новейшем видеокодеке MPEG-4.

Несколько опорных кадров

H.264 добавляет поддержку множественных опорных кадров. Это увеличивает сжатие за счет улучшения процесса прогнозирования и повышает устойчивость к ошибкам за счет возможности использовать другой опорный кадр в случае потери одного.

Один макроблок может использовать до 8 опорных кадров (до 3 для HDTV) с общим пределом в 16 опорных кадров, используемых в кадре.

Чтобы компенсировать различные временные расстояния между текущим и опорным кадрами, предсказанные блоки усредняются с настраиваемыми весовыми параметрами. Эти параметры могут быть либо встроены в поток битов, либо декодер может неявно извлекать их из временных ссылок.

Преобразование, масштабирование и квантование

H.264 использует простое целочисленное преобразование 4 × 4. Напротив, более старые видеокодеки используют DCT 8 × 8, который работает с коэффициентами с плавающей запятой. Дополнительное преобразование 2 × 2 применяется к четырем коэффициентам DC CbCr.Макроблоки Intra 16 × 16 имеют дополнительное преобразование 4 × 4, выполняемое для шестнадцати DC-коэффициентов Y.

Артефакты блокирования и звонка уменьшаются в результате меньшего размера блока, используемого H.264. Использование целочисленных коэффициентов устраняет ошибки округления, которые вызывают дрейфующие артефакты, характерные для видеокодеков на основе DCT.

Для квантования H. 264 использует набор из 52 однородных скалярных квантователей с шагом шага около 12,5% между каждым.

Затем квантованные коэффициенты сканируются от низкой частоты к высокой частоте с использованием одного из двух порядков сканирования.

Энтропийное кодирование

После квантования и зигзагообразного сканирования H.264 использует два типа энтропийного кодирования: кодирование с переменной длиной (VLC) и контекстно-адаптивное двоичное арифметическое кодирование (CABAC).

Для всего, кроме коэффициентов преобразования, H.264 использует одну универсальную таблицу VLC (UVLC), которая использует бесконечный набор кодовых слов (экспоненциальный голомб). Вместо нескольких таблиц VLC, используемых другими видеокодеками, в соответствии со статистикой настраивается только сопоставление с одной таблицей UVLC.

Для коэффициентов преобразования, которые потребляют большую часть полосы пропускания, H.264 использует контекстно-адаптивное кодирование переменной длины (CAVLC). На основании ранее обработанных данных выбирается лучшая таблица VLC.

Иммунотерапия, блокирующая контрольную точку, изменяет многомерную фенотипическую гетерогенность внутриопухолевых неоантиген-специфичных CD8 + Т-клеток мышей

Идентификация неоантиген-специфичных Т-клеток периферические ткани (т.е. селезенки, дренирующие и недренирующие лимфатические узлы) мышей с саркомой MCA с помощью массовой цитометрии, мы создали подход к окрашиванию комбинаторных тетрамеров трех металлов, как описано ранее

²³ . В дополнение к доминантным d42m1-T3 MCA-индуцированным мутантным опухолевым эпитопам саркомы mLama4 и mAlg8, мы (MMG, JPW и RDS), как ранее сообщалось, экспрессируются в T3, мы включили другой набор из 79 H-2K ^b -ограниченных предсказанных. кандидаты в опухолевые эпитопы (рис. 1а и дополнительная таблица 1) ⁵ .Одноклеточные суспензии из опухолей, селезенки, дренирующих и недренирующих лимфатических узлов были получены через 12 дней (момент времени, о котором ранее сообщалось для пиковых значений антиген-специфических инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL) до отторжения опухоли ⁵ ) после опухолевой клетки инокуляция и зондирование одновременно на все 81 потенциальную Т-клеточную специфичность, при окрашивании 28 различными антителами для дальнейшей идентификации и характеристики CD8 ⁺ Т-клеток (дополнительный рис. 1B и дополнительная таблица 2). Последующее клеточное штрих-кодирование облегчило одновременное получение клеток, полученных из каждого тканевого компартмента ²⁸ .

Рис. 1

Анализ неоантиген-специфических Т-клеток в опухолях и на периферии. a Скрининг Т-клеток CD8 ⁺ , нацеленных на 81 потенциальный мутантный комплекс пептид-MHC, с помощью комбинаторного метода окрашивания пептид-тетрамер MHC, выявил значительное количество CD8 ⁺ Т-клеток, ограниченных двумя основными мутантными эпитопами, мутантным Lama4 (mLama4) и мутант Alg8 (mAlg8) одновременно в опухолях, селезенке, дренирующих лимфатических узлах и недренирующих лимфатических узлах мышей с опухолью.Данные представляют собой средние частоты по крайней мере из трех независимых экспериментов. b Типичный пример окрашивания трехкодированным тетрамером дренирующих лимфатических узлов для идентификации антиген-специфических CD8 ⁺ Т-клеток. Т-клетки, специфичные для mLama4, были идентифицированы тетрамерами, меченными элементами Gd-157, Tb-159 Di и Yb-173 (0,89%), тогда как mAlg8-положительные клетки были идентифицированы тетрамерами, меченными Dy-163, Tm-169 и Yb- 173 элемента (0,23%). c Типичный пример фенотипов тетрамер-положительных (mLama4 и mAlg8) и тетрамер-отрицательных (Tetneg) CD8 ⁺ Т-клеток из опухолей, селезенки и лимфатических узлов мышей с опухолями. d Процентное содержание mLama-4 и mAlg8 CD8 ⁺ Т-клеток, экспрессирующих PD-1 и Tim-3, в опухолях, селезенке, дренирующих лимфатических узлах (dLN) и недренирующих лимфатических узлах (ndLN). Данные представляют собой средние значения ± SEM пяти независимых экспериментов. * p <0,05 на t -тест с поправкой на множественные сравнения с процедурой Холма – Сидака. e Частоты mLama4-специфических CD8 ⁺ T и mAlg8-специфических CD8 ⁺ T-клеток из опухолей, селезенки, дренирующих и недренирующих лимфатических узлов мышей с опухолью, получавших анти-CTLA-4 или изотипический контроль mAbs. Данные представляют собой средние значения ± SEM не менее пяти независимых экспериментов. * p <0,05 на t -тест с поправкой на множественные сравнения с процедурой Холма-Сидака

Для идентификации антигенспецифических, тетрамерных тройных положительных клеток мы использовали живые иммунные клетки (цисплатин ^— , ДНК ⁺ CD45 ⁺ ), исключенные В-клетки (CD19 ⁺ ) и выбранные клетки TCR-beta ⁺ , CD90 ⁺ , CD8 ⁺ и CD4 ^— (дополнительный рис.1A) и использовали автоматизированную стратегию гейтирования комбинаторный пептид-MHC ²³ , что было дополнительно подтверждено ручным стандартным двухосным гейтингом (фиг. 1b). Антигенная специфичность определялась стандартизированным порогом> 0,15% от общего количества CD8 ⁺ Т-клеток.

В соответствии с ранее опубликованными данными ⁵ , мы идентифицировали значительное количество CD8 ⁺ Т-клеток, ограниченных двумя преобладающими мутантными опухолевыми эпитопами, mLama4 (10,2 ± 3,2% как среднее значение ± SEM пяти экспериментов) и mAlg8 (9. 9 ± 3,8% как среднее значение ± стандартная ошибка среднего из пяти экспериментов), инфильтрируя опухоли мышей с опухолями. Кроме того, мы смогли обнаружить CD8 ⁺ Т-клетки, реагирующие с тетрамерами, специфичными для обоих эпитопов, в селезенке (mLama4: 0,8 ± 0,2%; mAlg8 0,6 ± 0,2% как среднее значение ± SEM из пяти экспериментов), истощая лимфатические узлы ( mLama4: 1 ± 0,2%; mAlg8 0,3 ± 0,1% как среднее ± SEM пяти экспериментов), а также недренирующие лимфатические узлы (mLama4: 0,4 ± 0,1%; mAlg8 0,2 ± 0,03% как среднее ± SEM пяти опыты) от той же группы животных.Мы не отслеживали CD8 ⁺ T-клетки, ограниченные каким-либо из других 79 потенциальных опухолевых H-2K ^b -ограниченных мутантных эпитопов-кандидатов (рис. 1a) или контролей (SIINFEKL), последовательно в разных типах тканей. Более того, ни один из предполагаемых эпитопов-кандидатов не был обнаружен в селезенках или лимфатических узлах животных дикого типа, не несущих опухоли.

Затем мы опросили фенотипы Т-клеток из каждой ткани, суммируя профили экспрессии молекул, связанных с дифференцировкой Т-клеток CD8 ⁺ (CD62L и CD44) ²⁹ активация / стимуляция (ICOS) ³⁰ , набор / торговля людьми (CXCR-3) ³¹ и истощение / дисфункция (Tim-3 и PD-1) ^32,33 . Мы наблюдали многочисленные фенотипические вариации в популяциях Т-клеток CD8 ⁺ в разных тканях, что подтвердило наше окрашивание антител. Например, CD44 активируется на клетках, испытавших антиген, после активации ³⁴ , и мы обнаружили самые высокие частоты CD44-положительных клеток в опухолях. Напротив, мы обнаружили большее количество Т-клеток, экспрессирующих CD62L и CXCR3 на периферии, последний, который, как недавно было показано, необходим для доставки Т-клеток CD8 ⁺ к меланомам in vivo ³⁵ (рис.1в). В отличие от их периферических аналогов, большое количество тетрамер-положительных клеток, инфильтрирующих опухоли, также экспрессирует PD-1 и Tim-3, и эти маркеры могут быть идентифицированы только на очень низком проценте антигенспецифических Т-клеток на периферии опухоли. несущие животные (рис. 1в, г). Эти данные демонстрируют, что массовая цитометрия вместе с комбинаторным подходом к окрашиванию тетрамеров может быть использована для всестороннего скрининга и фенотипической характеристики Т-клеток CD8 ⁺ , нацеленных на широкий диапазон предсказанных кандидатов в эпитопы одновременно во многих тканях.

Влияние иммунотерапии против CTLA-4 на частоту Т-клеток

Было продемонстрировано, что введение антител против CTLA-4 приводит к CD8 ⁺ Т-клеточно-зависимому отторжению опухоли, и лечение удвоило количество млама4- и mAlg8-специфические Т-клетки, инфильтрирующие опухоли мышей, несущих саркому MCA ⁵ . Это побудило нас оценить, влияет ли блокирование CTLA-4 также на величину этих антиген-специфичных CD8 ⁺ Т-клеток в селезенке, дренирующих и не дренирующих лимфатических узлах мышей с опухолью.Более того, поскольку недавно было показано, что лечение анти-CTLA-4 расширяет репертуар Т-клеток у пациентов с меланомой ¹⁰ , мы хотели оценить, вызывает ли CTLA-4-блокирующие праймы и вызывает ли Т-клеточные ответы против предполагаемых антигенов-кандидатов. которые не присутствуют у нелеченых животных с опухолями.

Мы обнаружили значительное увеличение амплитуды Т-клеточных ответов mLama4- (~ 2 раза) и mAlg8- (~ 1,5 раза) в опухолях мышей, получавших mAb против CTLA-4 (рис. 1д). Однако частоты Т-клеток, ограниченных этими иммунодоминантными антигенами, обнаруженными в периферических компартментах, остались неизменными, и мы не наблюдали значительных различий в частотах таких Т-клеток в селезенке или лимфатических узлах мышей с опухолями, проходящих иммунотерапию (рис. 1е). ). Среди всех протестированных эпитопов мы не смогли идентифицировать новые антиген-специфичности (> 0,15%) как в опухолях, так и в периферической циркуляции мышей, обработанных анти-CTLA-4, которые также не наблюдались у мышей, обработанных изотипом mAb.Эти результаты предполагают, что лечение анти-CTLA-4 избирательно индуцирует повышенную пролиферацию неоантиген-специфических Т-клеток в опухоли.

Углубленное профилирование антиген-специфических TIL

Затем мы исследовали фенотипические изменения mLama4- и mAlg8-специфических Т-клеток, которые были связаны с лечением анти-CTLA-4. Хотя фенотипические и функциональные изменения антиген-специфических TIL в ответ на иммунотерапию были описаны ранее, это было либо путем оценки экспрессии отдельных маркерных молекул, либо путем оценки профилей экспрессии генов в отсортированных популяциях клеток ⁵ . Имея возможность одновременно опросить 28 соответствующих поверхностных молекул на уровне одной клетки, используя оставшиеся антитела панели окрашивания тетрамера, мы смогли глубоко профилировать эти клетки и проанализировать их фенотипы, применяя t-распределенное стохастическое встраивание соседей (t- SNE) алгоритм ^24,25,26 . Путем картирования клеток со сходными фенотипами в близлежащие точки в двумерное пространство, t-SNE разделяет отдельные клеточные подмножества и уменьшает высокую размерность данных массовой цитометрии в двух измерениях, сохраняя при этом общие клеточные взаимоотношения.Мы объединили данные, полученные для TIL, специфичных для mLama4 и mAlg8, от мышей с опухолью, подвергнутых лечению анти-CTLA-4, вместе с данными, полученными от мышей, получавших изотипные mAb, для создания общей карты всех наблюдаемых фенотипических профилей опухолеспецифических TIL. . Используя эти критерии и полученный двумерный точечный график t-SNE, мы смогли визуально обнаружить несколько отдельных кластеров клеток всех возможных фенотипов, наблюдаемых из опухолеспецифических Т-клеток, полученных из опухолей (рис. 2а). Фенотипы этих кластеров с точки зрения средних уровней экспрессии каждого оцениваемого маркера были суммированы в виде тепловых графиков для каждого кластера (рис.2а). Основываясь на этих графиках, мы очертили десять различных фенотипических кластеров антиген-специфических Т-клеток, которые состоят из клеток, специфичных для любого неоантигена, полученного из обработанных анти-CTLA-4 и обработанных изотипическим контролем субъектов, несущих опухоль (рис. 2а).

Рис. 2

Неоантиген-специфические TIL проявляют разные фенотипы. Анализ выполняли на объединенном наборе данных от инфильтрирующих опухоль Т-клеток, специфичных для mLama4 и mAlg8, мышей, получавших анти-CTLA-4, и мышей, получавших контрольные (изотипные) mAb. a Ручной стробирование по антиген-специфическим CD8 ⁺ Т-клеточные кластеры, сегрегированные с помощью t-SNE, идентифицировали в общей сложности 10 различных кластеров. Медианные интенсивности экспрессии для каждого из исследованных маркеров были нанесены на график для всех наблюдаемых кластеров и суммированы в виде тепловой карты. b Представление различных фенотипических кластеров, очерченных t-SNE, с использованием стратегии последовательного стробирования двухосных точечных графиков на маркерах сигнатур, характерных для каждого кластера. c Гистограммы, показывающие кластеры с дифференциальными уровнями экспрессии маркеров, связанных с дисфункцией Т-клеток (PD-1, Lag-3, Tim-3 и CD160) и GITR.Кластер 2 (C2) служил аналогом

На основе кластеров клеток, идентифицированных с помощью анализа t-SNE, была разработана стратегия стробирования с использованием стандартных двухосных графиков. Это позволило нам построить рабочие определения для каждого из этих кластеров ячеек (рис. 2b). Построив график PD-1 против KLRG-1, мы смогли идентифицировать кластеры три (C3), четыре (C4) и пять (C5) в соответствии с их высоким PD-1 и отсутствием экспрессии KLRG-1. Хотя все три кластера также были положительными для Sca-1, C3 был отрицательным для Tim-3, и C4, а также C5 можно было дополнительно различить по интенсивности их экспрессии для Tim-3 и CD39. Кластеры 6 (C6) и 10 (C10) составляли KLRG-1-положительные клетки и могли быть дополнительно подразделены на основе их профилей экспрессии Sca-1 и Tim-3. PD-1 и KLRG-1-отрицательные клетки были разделены на кластеры один (C1) и два (C2), а также кластеры семь (C7), восемь (C8) и девять (C9) в соответствии с их Sca-1 и Tim. -3 уровня экспрессии. Кластеры C1 и C2 были Sca-1-негативными, но демонстрировали дифференциальную экспрессию CD27, тогда как C7, C8 и C9 экспрессировали Sca-1, но демонстрировали дифференциальные уровни экспрессии Tim-3 и CD160, соответственно (рис.2б).

Повышенные уровни экспрессии PD-1, Lag-3 и Tim-3 на mLama4 и mAlg8-специфичных TIL-клетках ранее были связаны с дисфункциональным фенотипом, который сопровождается серьезным функциональным дефицитом этих клеток ⁵ . Согласно интенсивности экспрессии этих маркеров, обнаруженных на клетках внутри кластеров, разделенных t-SNE, кластеры C3, C4 и C5, по-видимому, содержат такие дисфункциональные Т-клетки, хотя и в разной степени, тогда как кластер C2 не экспрессирует ни одного из маркеров сигнатуры. (Рисунок.2в). Примечательно, что мы также наблюдали высокие уровни экспрессии GITR — молекулы, которая, как было показано, участвует в противоопухолевом иммунитете ^36,37 — на всех клетках, ограниченных кластерами C3, C4 и C5.

Эти результаты в совокупности демонстрируют, что t-SNE способен разделять антиген-специфические TIL, полученные от мышей, обработанных анти-CTLA-4, и контрольных мышей, на несколько отдельных кластеров, таким образом выявляя заметные вариации в фенотипах этих неоантиген-специфичных TIL.

Антиген-специфические TIL составляют гетерогенную популяцию

Чтобы охарактеризовать фенотипы антиген-специфических TIL, мы сначала сосредоточили внимание на данных, полученных от мышей, несущих опухоль, которые не подвергались блокаде CTLA-4.Из этого анализа мы обнаружили, что Т-клетки, специфичные для любого антигена, можно подразделить на несколько кластеров, таким образом, представляя гетерогенную клеточную популяцию среди Т-клеток, которые были ограничены одним опухолевым эпитопом (рис. 3а). Среди 10 различных кластеров, идентифицированных t-SNE, как описано выше, большинство Т-клеток от нелеченых мышей с опухолью можно было найти в кластерах C1 – C6 (, черный обведен, , с частотой> 10% для любого из двух специфичности антигена), тогда как было обнаружено, что меньшие клетки, специфичные для любого из эпитопов, распределены по кластерам C7 – C10 ( серый кружок ).В частности, в то время как большинство mLama4-специфических Т-клеток может быть обнаружено в пределах C1-C3, мы обнаружили, что самые высокие частоты mAlg8-специфических Т-клеток присутствовали в C3-C6. Чтобы подтвердить существование различных фенотипических кластеров среди опухолеспецифических Т-клеток, которые были выделены из набора данных большой размерности с помощью алгоритма t-SNE, мы дополнительно разработали панель проточной цитометрии, которая позволила нам очертить преобладающие кластеры Т-клеток ( C1 – C6) на сопоставимых частотах (дополнительный рис.2A) у необработанных мышей с опухолью в соответствии со стратегией сортировки, описанной на фиг. 2b. Из-за ограниченного количества маркеров, доступных для этих окрашиваний, мы не смогли четко отделить четвертый кластер (C4) от пятого кластера (C5) и поэтому объединили два кластера, чтобы иметь возможность сравнивать эти окрашивания с данными, полученными из подход к окрашиванию методом массовой цитометрии с высокой размерностью. Точно так же t-SNE смог разделить эти кластеры на двумерной карте, хотя и в меньшей степени из-за ограничений сложности, связанных с панелью окрашивания проточной циометрии (дополнительный рис.2Б). Примечательно, что, применяя эти окрашивания к опухолям от отдельных мышей, мы дополнительно исключили возможность того, что наблюдаемая гетерогенность была результатом объединения нескольких опухолей, необходимых для анализа с помощью массового цитометра.

Рис. 3

Гетерогенность опухолеспецифических TIL изменяется после лечения. a Большинство антиген-специфических Т-клеток от нелеченых мышей с опухолями можно идентифицировать в пределах шести кластеров (C1 – C6), сегрегированных с помощью t-SNE. Т-клетки, специфичные для mLama4 и mAlg8, распределены неравномерно с различным процентным содержанием клеток, обнаруженных в отдельных кластерах ( n = 5 мышей на группу). b Характер распределения TIL, специфичных для mLama4 и mAlg8, в соответствующих кластерах согласуется во всех независимых экспериментах. Различия в процентах TIL, специфичных для mLama4 и mAlg8, положительных для совокупности маркеров, которые идентифицируют каждый из кластеров, сегрегированных по t-SNE ( p = 0,008, точный тест Фишера: n = 5). c Средняя интенсивность флуоресценции и процентное содержание клеток показывают сравнимые уровни Ki-67, но различия в экспрессии гранзима B в пределах отдельных кластеров антиген-специфических Т-клеток.CD8 ⁺ Т-клетки из наивной селезенки служили контролем. Данные представляют собой средние значения ± SEM не менее трех независимых экспериментов. * p <0,05 на t -тест с поправкой на множественные сравнения с процедурой Холма – Сидака. d Обработка анти-CTLA-4 сдвигает TILS, специфичные для mLama4 и mAlg8, от кластеров C1 – C5 к кластерам C7-C10 на графике t-SNE. e Обработка мышей с опухолью анти-CTLA-4 снижает количество PD1 ⁺ GITR ⁺ mLama4- и mAlg8-специфичных TIL и усиливает экспрессию Sca-1 на клетках, специфичных для любого эпитопа ( n = 5 мышей на группу). f mLama4- и mAlg8-специфические Т-клетки демонстрируют более высокие частоты маркеров, связанных с кластером C7-C10 после обработки анти-CTLA-4, по сравнению с их контрольными (изотипными) mAb, обработанными аналогами, и показывают сопоставимые проценты между специфичностями обоих антигенов. Данные представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для пяти независимых экспериментов

Хотя Т-клетки, ограниченные mLama4 или mAlg8, частично перекрывались, они не полностью сгруппировались вместе. Мы отметили заметные различия в частотах кластеров, соответствующих разной специфичности антигена. Более высокий процент mLama4-специфических Т-клеток был обнаружен в кластерах C1, C2 и C3, которые представлены фенотипом KLRG-1 ^—, PD-1 ^— (C1 и C2), а также KLRG-1. ^— , ПД-1 ⁺ ячеек (С3). Напротив, более высокий процент клеток, специфичных для mAlg8, может быть обнаружен в кластерах C4, C5 и C6, которые характеризуются клетками, экспрессирующими как Tim-3, так и PD-1 (C4 и C5), а также клетками, экспрессирующими KLRG-1. (C6) (Рис. 3a). Основываясь на этих определениях, мы обнаружили, что эти различия в фенотипических паттернах между специфичностями обоих антигенов согласуются в независимых экспериментах (рис.3б).

Блокирование CTLA-4 у мышей с опухолью приводило к более высокой частоте Т-клеток, специфичных для mLama4 и mAlg8. Чтобы оценить, отличаются ли пролиферации фенотипически разные антиген-специфические TIL, полученные от необработанных мышей с опухолью, мы оценили экспрессию Ki-67 в клетках, полученных из различных кластеров, с помощью традиционной проточной цитометрии. Кроме того, мы оценили способность этих клеток экспрессировать гранзим B, чтобы оценить их функциональный статус. Мы обнаружили, что примерно половина клеток, присутствующих в каждом из кластеров, была положительной по Ki-67.Однако мы не наблюдали значительных различий в уровнях пролиферации этих клеток среди кластеров (рис. 3c). Напротив, в то время как большинство кластеров характеризовалось низкой экспрессией гранзима B, мы обнаружили значительно более высокие уровни экспрессии в кластере четвертый и пятый по сравнению с другими кластерами (рис. 3c).

В заключение, антиген-специфические TIL представляют собой гетерогенную клеточную популяцию, а Т-клетки, ограниченные отдельными мутантными опухолевыми эпитопами, проявляют уникальный фенотип с различными функциональными характеристиками.

Блокирование CTLA-4 подталкивает Т-клетки к сходному фенотипу.

Затем мы изучили фенотипы неоантиген-специфических Т-клеток, полученных от мышей, несущих опухоль, которые подверглись иммунотерапии блокадой контрольных точек против CTLA-4. Этот анализ поразил тем, что клетки, занимающие области C1 – C5, в основном отсутствовали в опухолях этих обработанных мышей. Вместо этого большинство неоантиген-специфичных Т-клеток было обнаружено в кластерах C7 – C10, и частотные распределения были сходными для обоих антигенов (рис.3d). Несмотря на дифференциальные уровни экспрессии маркеров, связанных с дисфункцией, клетки в кластерах C3 – C5 соответствовали клеткам с фенотипом PD-1 ⁺ GITR ⁺ (см. Рис. 2a). Блокирование CTLA-4 значительно снижает частоты клеток в кластерах C3 – C5 и, таким образом, почти устраняет клетки, экспрессирующие маркеры, связанные с дисфункцией Т-клеток (например, PD-1 и Tim-3) (рис. 3d). Используя стандартное двухосное стробирование, мы дополнительно подтвердили, что лечение анти-CTLA-4 привело к увеличению количества TIL, специфичных для mLama4 и mAlg8, которые демонстрируют низкий уровень экспрессии PD-1 и низкий уровень экспрессии GITR (рис.3д). Кроме того, эти клетки проявляли высокую экспрессию Sca-1.

Мы (M.M.G., J.P.W. и R.D.S.) ранее показали, что, помимо блокирования CTLA-4, лечение анти-PD-1 делает неоантиген-специфические Т-клетки способными к отторжению опухоли. Чтобы оценить, происходит ли это вместе с таким массивным фенотипическим изменением, мы выполнили наш подход к высокоразмерному профилированию на mLama4-специфических TIL мышей, которые прошли лечение анти-PD-1 или остались не леченными (изотипический контроль). Точно так же мы наблюдали резкий сдвиг различных опухолеспецифических кластеров Т-клеток к новому положению на двумерном графике t-SNE.Подобно изменениям, вызванным блокированием CTLA-4, мы обнаружили несколько изменений в паттернах экспрессии различных оцениваемых маркерных молекул, в частности, существенное снижение экспрессии маркеров, которые связаны с дисфункциональным фенотипом Т-клеток, а также повышенную регуляцию Sca. -1 (дополнительный рис. 3A).

Появление отдельных кластеров со сравнимыми частотами среди Т-лимфоцитов, специфичных для mLama4 и mAlg8, после терапии анти-CTLA-4 mAb свидетельствует о том, что лечение индуцировало неоантиген-специфические TIL для получения сходного фенотипического профиля, в котором также отсутствует экспрессия маркеров, связанных с дисфункция. Действительно, когда мы сравнивали фенотипические характеристики этих клеток с обработкой анти-CTLA-4 и без нее в разных экспериментах, мы смогли обнаружить более высокие частоты Т-клеток, проявляющих фенотип PD-1 ^— и GITR ^— независимо от их эпитопные ограничения (рис. 3е). Согласно их фенотипическим профилям, C7-10 можно классифицировать как кластеры, состоящие из клеток, которые экспрессируют высокие уровни Sca-1 и низкие уровни PD-1 (см. Рис. 2a). По сравнению с клетками, полученными от мышей, несущих опухоль, обработанных изотипическим контрольным mAb, мы наблюдали большее количество этих клеток со сравнимым процентом среди двух антигенных специфичностей (рис.3е). Кроме того, клетки в C10 связаны с высокой экспрессией KLRG-1, и может быть обнаружено большее количество Т-клеток, специфичных для mLama4 и mAlg8, с аналогичной частотой по сравнению с их аналогами, обработанными mAb изотипического контроля. Мы обнаружили, что экспрессия KLRG-1 также связана с C6, и мы обнаружили клетки, демонстрирующие C6-подобные характеристики среди Т-клеток, специфичных для mAlg8, после иммунотерапии на уровнях, сопоставимых с частотами mAlg8-специфических Т-клеток, полученных от животных с опухолями, обработанных изотипическим контролем.

Эти данные показывают, что иммунотерапия рака на этой мышиной модели индуцировала драматические фенотипические изменения неоантиген-специфических Т-клеток. Более того, Т-клетки с различным использованием эпитопа приобрели сходный фенотип, в котором отсутствовали поверхностные молекулы, связанные с дисфункцией Т-клеток.

Иммунотерапия влияет на TIL, но не на периферические Т-клетки

Чтобы определить, наблюдаются ли фенотипические изменения TIL, специфичных для mLama4 и mAlg8, на периферии мышей, несущих опухоли, леченных анти-CTLA-4, мы использовали данные, полученные из периферических CD8 ⁺ Т-клеток для широкого анализа результирующих изменений в популяции доминантных неоантиген-специфичных Т-клеток CD8 ⁺ из двух групп лечения с использованием вышеупомянутого подхода уменьшения размерности на основе t-SNE.Из-за низкой частоты встречаемости антиген-специфических Т-клеток в каждой из этих оцениваемых периферических тканей и для сравнения фенотипов Т-лимфоцитов CD8 ⁺ , инфильтрирующих опухоли, мы также включили тетрамер-отрицательные Т-клетки CD8 ⁺ . для этого анализа. Примечательно, что хотя большинство тетрамер-отрицательных Т-клеток CD8 ⁺ , выделенных из опухолей, были фенотипически отличны от своих антиген-специфичных аналогов, мы обнаружили частичное перекрытие между тетрамер-положительными и отрицательными клетками на двумерном графике t-SNE.Мы разделили на категории в общей сложности четыре кластера, которые показали различное процентное содержание всех TIL, и которые могли быть дополнительно охарактеризованы в соответствии с профилями дифференциальной экспрессии оцениваемых маркерных молекул (дополнительный рисунок 4A – C).

В отличие от TIL, специфичных для mLama4 и mAlg8, при сравнении неоантиген-специфических клеток, полученных из периферических тканей изотипа, и мышей, обработанных mAb против CLTA-4, наблюдались очень незначительные фенотипические изменения. В то время как фенотипические изменения в антиген-специфических TIL от мышей, получавших анти-CTLA-4 mAb, были отражены заметным сдвигом их позиций, занятых на двумерном графике t-SNE (рис. 4a), мы не обнаружили существенных различий в кластерных областях, занятых Т-клетками, происходящими из лимфатических узлов или селезенки, специфичными для любого антигена, когда клетки были получены от мышей, подвергшихся лечению анти-CTLA-4 (рис. 4a и дополнительный рис. 5). Точно так же, хотя мы обнаружили заметное изменение положения инфильтрирующих опухоль mLama4-реактивных клеток у мышей, прошедших терапию анти-PD-1, мы не делали таких наблюдений в лимфатических узлах этих мышей (дополнительный рис. 3b).

Рис. 4

Блокирование CTLA-4 влияет на фенотипы неоантиген-специфичных TIL. a Визуализированная карта t-SNE, подчеркивающая распределение тетрамер-положительных антиген-специфических Т-клеток и тетрамер-отрицательных клеток в опухолях и дренирующих лимфатических узлах (как репрезентативных для периферии). Кластеры Т-клеток, специфичные для mLama4 или mAlg8 из дренирующего лимфатического узла, могут быть идентифицированы в аналогичных местах на двумерном графике t-SNE, независимо от лечения анти-CTLA-4 или контрольных (изотипных) mAb, тогда как антиген-специфические CD8 ⁺ Т-клетки из опухолей локализуются в различных областях после иммунотерапии ( n = 5 мышей на группу). b Тепловой график относительной экспрессии каждой маркерной молекулы, оцененной для mAlg8- и mLama4-специфичных CD8 ⁺ Т-клеток одновременно в лимфатических узлах, селезенке и опухолях от анти-CTLA-4 и контрольных (изотипных) mAb, обработанных опухолью- несущие мышей. Показаны средние баллы z из пяти независимых экспериментов. * p <0,05 по t -тест и коррекция BH с использованием коэффициента ложного обнаружения 0,25

Эти результаты предполагают, что основные эффекты иммунотерапии на фенотипы Т-клеток были ограничены неоантиген-специфическими Т-клетками, инфильтрирующими опухоль.Для дальнейшего объективного сравнения фенотипических профилей опухолеспецифических клеток, полученных из опухоли по сравнению с периферией с обработкой анти-CTLA4 и без нее в отдельных экспериментах, мы усреднили среднюю интенсивность экспрессии из независимых экспериментов (90 · 102 n 90 · 103 = 5) для каждого из не- молекулы клонов оценивали и вычисляли z -баллов для каждого фенотипического маркера и усредняли их для каждой специфичности Т-клеток, как описано ранее ²³ . Мы представили данные в виде тепловых графиков для значимой оценки различий в фенотипических профилях mLama4- и mAlg8-реактивных клеток в различных тканях мышей, получавших либо изотипический контроль, либо mAb против CTLA-4.В опухолях обработанных животных блокада CTLA-4 вызвала значительно измененную экспрессию маркеров, связанных с дисфункцией (PD-1, Lag-3 и CD160), активацией (CD25, GITR и CD38), а также костимуляцией. и развитие (CD27 и CD127) на mLama4-специфических Т-клетках. Аналогичные результаты были получены, когда мы исследовали экспрессию маркеров mAlg8-ограниченных Т-клеток в различных тканях (рис. 4b). Из этих тепловых графиков также было очевидно, что фенотипы периферических Т-лимфоцитов CD8 ⁺ , специфичные для любого антигена, в отличие от неоантиген-специфичных TIL, не подвергались влиянию анти-CTLA-4 иммунотерапии, поскольку не наблюдались различия в экспрессии. любой из маркерных молекул, оцениваемых одновременно в селезенке и дренирующих и недренирующих лимфатических узлах.